ELISA試劑盒實(shí)用小竅門,值得看看!

1. 標(biāo)本及收集、貯運(yùn)要素
① 嚴(yán)峻溶血：以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過(guò)氧化物酶樣活性，催化底物顯色構(gòu)成假陽(yáng)性；
② 混有紅細(xì)胞的血清易沉積或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈
③ 如有**污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)發(fā)生假陽(yáng)性反響；
④ 標(biāo)本凝結(jié)不全，有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)刻快速檢測(cè)，常在血液還未開(kāi)端凝結(jié)時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過(guò)程中可以構(gòu)成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊，易構(gòu)成假陽(yáng)性成果；
⑤ 采血試管洗刷不完全、重復(fù)運(yùn)用易穿插污染
⑥ 塑料試管能吸附抗原物質(zhì) ，樣本久置在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量下降構(gòu)成假陰性。
血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)，嚴(yán)峻溶血標(biāo)本禁用。一般說(shuō)來(lái)，在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃，標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)刻過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致血清IgG 聚合，使間接法的 試劑 本底加深。超過(guò)一周測(cè)定的需-20℃保存。凍住血清融解后，蛋白質(zhì)部分濃縮，散布不均，應(yīng)充沛混勻并避免發(fā)生氣泡。混濁或有沉積的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾，澄清后再檢測(cè)。重復(fù)凍融會(huì)使 抗體 效價(jià)下跌，所以測(cè) 抗體 的血清標(biāo)本如需保存作屢次檢測(cè)，宜少數(shù)分裝冰存。
 2. 之操作技術(shù)的影響
① 應(yīng)確保清潔，整個(gè)操作過(guò)程中確保酶標(biāo)板不觸摸次氯酸。以上的辦法可以使“花板”降至限度。然后提高檢測(cè)的特異性。并得到更**、可靠的試驗(yàn)成果。
② 合理安排檢丈量，避免反響板過(guò)多構(gòu)成洗板等候時(shí)刻長(zhǎng)。
③ 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板外表輕拭吸干。
④ 用洗板機(jī)洗板時(shí)，確保洗液注滿各孔，洗板針疏通，洗完板后在吸水紙（挑選干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干：還要避免針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過(guò)程中易發(fā)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的呈現(xiàn)。
⑤ 顯色劑盡量在臨用前制造，堅(jiān)持不必過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不必。
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