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原代細胞培養實驗方法

日期:2024-11-23 21:56
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摘要:
  原代細胞的培養是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養。因此,較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養,此時的細胞保持原有細胞的基本性質,如果是正常細胞,仍然保留二倍體數。原代細胞在培養的過程中,也可能產生基因突變而形成無限傳代的細胞株,傳代次數越多,就越有可能變成細胞株(基因缺陷型),因此科學界也通常把**代至第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞培養。 
  原代細胞培養實驗室常規步驟為: 
  1)將動物組織從機體中取出并**除去存留在組織上的**、病毒、**等污染源,這些污染源將會所需培養的原代細胞凋亡、停止生長和繁殖直至死亡,因此整個原代細胞培養過程中**在無菌狀態下進行。
  2)將組織塊在選定的蛋白酶溶液中浸泡20-30分鐘,通常在37C水浴里進行,而蛋白酶的選定取決于器官組織和所需細胞的類型,比如成骨、肌肉、心、肝等就需要用胰蛋白酶才能分解而出單個細胞,但是對于腦組織和乳腺等軟組織,就只能用分解能力較弱的膠原蛋白酶, 以免損傷分散出來的單個細胞。
  3)將分散而成的單個細胞置于合適的培養基(含有特殊細胞生長因子、添加劑以及血清, 或者無血清培養基)中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖, 整個過程都是在無菌情況下操作。


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